一、實(shí)驗(yàn)材料：

三孢布拉霉（產(chǎn)β-胡蘿卜素， + 菌）Neurospora crassa  CCTCC AF 97006

三孢布拉霉（產(chǎn)β-胡蘿卜素， - 菌）Neurospora crassa  CCTCC AF 96002

三孢布拉霉發(fā)酵產(chǎn)生β-胡蘿卜素：

三孢布拉霉正負(fù)菌混合培養(yǎng)會(huì)增加其β-胡蘿卜素的產(chǎn)量。正、負(fù)菌混合培養(yǎng)時(shí)屬于有性生殖，正、負(fù)菌的菌絲體互相接觸，可生成有性生殖促進(jìn)劑三孢酸（在β-胡蘿卜素合成過(guò)程中存在的一種酶）。此酶主要在八氫番茄紅素之后起作用。三孢酸在培養(yǎng)基中能促進(jìn)上述酶的大量產(chǎn)生，使得八氫番茄紅素大量轉(zhuǎn)化為β-胡蘿卜素。

二、實(shí)驗(yàn)步驟：

 孢子懸液的制備。在無(wú)菌條件下，分別挑取斜面培養(yǎng)的三孢布拉霉正、負(fù)菌接種到60ml PDA固體培養(yǎng)基的250ml三角瓶中，在30℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，待菌絲長(zhǎng)滿后，將三角瓶置于18℃低溫下刺激2天，此時(shí)可以看到三孢布拉霉正、負(fù)菌的菌絲都生成大量孢子。加入60ml含有玻璃珠的滅菌生理鹽水，180r/min搖床振蕩處理10min。將孢子充分打散，得到孢子懸液。然后吸取1ml孢子懸液到滅菌的離心管中。血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)后，調(diào)整孢子濃度至5ⅹ103個(gè)/ml。 將正、負(fù)菌按1:2的比例接種到發(fā)酵培養(yǎng)基中。接種量為10%。28℃培養(yǎng)。每天對(duì)發(fā)酵液的生物量及產(chǎn)生β-胡蘿卜素進(jìn)行測(cè)定。

 三、實(shí)驗(yàn)結(jié)果：

結(jié)果表明7d時(shí)生物量達(dá)到最大值，培養(yǎng)基中的糖幾乎耗盡。發(fā)酵8dβ-胡蘿卜素產(chǎn)量達(dá)到最大值。

教學(xué)建議：

 最佳發(fā)酵條件為，初始pH為6.5，裝液量為90/250ml。搖床轉(zhuǎn)速為180r/min，發(fā)酵溫度28℃。

 發(fā)酵培養(yǎng)基，葡糖糖100g/L、酵母浸粉12g/、磷酸二氫鉀3g/L、磷酸氫二鈉3g/L、七水硫酸鎂0.5g/L。

 最佳保存條件：室溫保存，可用于一周教學(xué)實(shí)驗(yàn)。