| 產(chǎn)品名稱(chēng) |
小鼠氣管上皮細(xì)胞 |
| 商品貨號(hào) |
MZ-418 |
| 組織來(lái)源 |
昆明、C57小鼠（3-4周齡）8-10只 |
| 規(guī)格 |
5×105cells/T25培養(yǎng)瓶 |
| 生長(zhǎng)特性 |
貼壁 |
| 細(xì)胞形態(tài) |
上皮細(xì)胞樣 |
| 培養(yǎng)基 |
M199培養(yǎng)基，含F(xiàn)BS、上皮細(xì)胞生長(zhǎng)添加劑、Hydrocortisone、Insulin、Transferrin、Epinephrine、Penicillin、Streptomycin等 |
| 細(xì)胞污染 |
HIV-1、 HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌檢測(cè)陰性。 |
| 細(xì)胞描述 |
氣管以軟骨、肌肉、結(jié)締組織和粘膜構(gòu)成。軟骨為"C"字形的軟骨環(huán)，缺口向后，各軟骨環(huán)以韌帶連接起來(lái)，環(huán)后方缺口處由平滑肌和致密結(jié)締組織連接，保持了持續(xù)張開(kāi)狀態(tài)。在近端下呼吸道的上皮表面，主要是纖毛上皮細(xì)胞，它與基底細(xì)胞及杯狀細(xì)胞一起構(gòu)成假?gòu)?fù)層上皮，到達(dá)氣管腔表面的大部分細(xì)胞為纖毛上皮細(xì)胞，基底細(xì)胞與基底膜相連，通過(guò)半橋粒固定于上皮，在遠(yuǎn)端下呼吸道中，Clara細(xì)胞和基底細(xì)胞占優(yōu)勢(shì)，纖毛細(xì)胞已不存在，杯狀細(xì)胞數(shù)量減少，上皮形態(tài)更象柱狀，整個(gè)上皮存在于一薄層基底膜上，通過(guò)間質(zhì)結(jié)締組織組成的網(wǎng)狀層相互支撐，上皮下存在其它的結(jié)締組織和纖維細(xì)胞。 |
| 細(xì)胞傳代步驟 |
如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。2. 加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。3. 按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。4. 將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。 |
| 細(xì)胞復(fù)蘇步驟 |
將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過(guò)夜）。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。 |
| 細(xì)胞凍存步驟 |
待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面T25瓶為例； 1．細(xì)胞凍存時(shí)，棄去培養(yǎng)基后，PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml胰酶，細(xì)胞變圓脫落后，加入2ml完全培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)。 2．1000RPM離心5分鐘去掉上清。用血清重懸浮，加DMSO至最終濃度為10%。加入DMSO后迅速混勻，按每1ml的數(shù)量分配到凍存管中，注意凍存管做好標(biāo)識(shí)。本公司按每個(gè)凍存管細(xì)胞數(shù)目大于1X106個(gè)細(xì)胞凍存。3．將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80度冰箱，至少2個(gè)小時(shí)以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲(chǔ)存。記錄凍存管位置以便下次拿取。 |
