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MEF
MEF
規格:
貨期:
編號:MZ-3009
品牌:Mingzhoubio

活化細胞
凍存細胞
熒光標記細胞

規格:
T25瓶
凍存管

產品名稱 MEF
商品貨號 MZ-3009
中文名稱 昆明白小鼠胚胎成纖維細胞,經射線處理,P3,100萬細胞
組織來源 小鼠,昆明白品系 取孕12.5天的昆明白小鼠的胚胎制備后經過射線處理
形態特征 成纖維細胞
特征特性 MEF昆明白小鼠胚胎成纖維細胞,經射線處理,P3,100萬細胞描述: 經射線處理的P3代飼養層細胞,每支細胞量1×106,供mES使用。
細胞污染 HIV-1、 HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌檢測陰性。
培養條件 88%DMEM高糖+10%FBS+1%Glutamax+100×NEAA 1ml
細胞凍存步驟 待細胞生長狀態良好時,可進行細胞凍存。下面T25瓶為例; 1.細胞凍存時,棄去培養基后,PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml胰酶,細胞變圓脫落后,加入2ml完全培養基終止消化,可使用血球計數板計數。 2.1000RPM離心5分鐘去掉上清。用血清重懸浮,加DMSO至最終濃度為10%。加入DMSO后迅速混勻,按每1ml的數量分配到凍存管中,注意凍存管做好標識。明舟生物按每個凍存管細胞數目大于1X106個細胞凍存。3.將凍存管置于程序降溫盒中,放入-80度冰箱,至少2個小時以后轉入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。
復蘇細胞步驟 將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入4mL培養基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養瓶中培養過夜(或將細胞懸液加入10cm皿中,加入約8ml培養基,培養過夜)。第二天換液并檢查細胞密度。
細胞傳代步驟 如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養。1. 棄去培養上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養瓶中,置于37℃培養箱中消化1-2分鐘,然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,若細胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養瓶后加少量培養基終止消化。3. 按6-8ml/瓶補加培養基,輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養液后吹勻。4. 將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。
姓名 手機號(微信同號) QQ
梅經理 17280875617 1438578920
胡經理 13345964880 2438244627
周經理 17757487661 1296385441
于經理 18067160830 2088210172
沈經理 19548299266 2662369050
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