| 產(chǎn)品名稱 |
Super Tube |
| 商品貨號 |
MZ-0306 |
| 中文名稱 |
狗腎細胞 |
| 形態(tài)特征 |
上皮細胞 |
| 生長特性 |
貼壁生長 |
| 特征特性 |
從表觀正常的成年雌性可卡犬中建立了細胞株MDCK(ATCCCCL-34)，從中克隆建立了狗上皮樣細胞株SuperTube。當維持高細胞濃度時，Supertube形成大量的小管(據(jù)報道，24孔板的每孔鋪7x105細胞，３天內(nèi)就能形成小管)。要形成小管，細胞需要每天兩次換液以提供足夠養(yǎng)分。與原始細胞株相比，SuperTube的c-AMP的檢測水平低得多，在forskolin刺激下讀出的腺苷環(huán)化酶水平也低；它的跨上皮抗性也比SuperDome(ATCCCRL-2286)和MDCK都低。在本庫通過支原體檢測。 |
| 細胞污染 |
HIV-1、 HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌檢測陰性。 |
| 培養(yǎng)條件 |
DMEM/F12(1:1): Ham＇s F12/DME Medium (DME H-16/F-12 50% Mixture w/o HEPES, with NEAA Medium) 優(yōu)質胎牛血清，10% |
| 傳代方法 |
消化3-5分鐘。1:2。3天內(nèi)可長滿。 |
| 細胞凍存步驟 |
待細胞生長狀態(tài)良好時，可進行細胞凍存。下面T25瓶為例； 1．細胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后，PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml胰酶，細胞變圓脫落后，加入2ml完全培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計數(shù)板計數(shù)。 2．1000RPM離心5分鐘去掉上清。用血清重懸浮，加DMSO至最終濃度為10%。加入DMSO后迅速混勻，按每1ml的數(shù)量分配到凍存管中，注意凍存管做好標識。明舟生物按每個凍存管細胞數(shù)目大于1X106個細胞凍存。3．將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80度冰箱，至少2個小時以后轉入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。 |
| 復蘇細胞步驟 |
將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或將細胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并檢查細胞密度。 |
| 細胞傳代步驟 |
如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。2. 加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。3. 按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。4. 將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。 |
| 凍存條件 |
基礎培養(yǎng)基+8%DMSO+20%FBS |
