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人高轉移潛能肝癌細胞MHCC-97H

細胞介紹

來源于中山醫院, 用人肝癌細胞株MHCC97-H 接種裸鼠, 進行3 次肺轉移篩選, 取肺轉移瘤建成皮下接種后高度自發性肺轉移的肝癌細胞系

 

細胞特性

12)   1來源肝癌

2)形態上皮細胞樣

3)含量:> 1 x106 個/ml

4)污染支原體、細菌、酵母和真菌檢測為陰性

S)    規格T25 或者 1ml  凍存管包裝

 

運輸和保存: 可選擇干冰運輸及發送復蘇存活細胞方式:1干冰運輸, 收到后立即轉入液氮凍存或直接復蘇2)存活細

 

胞,收到后應繼續生長,傳代達到細胞生長狀態良好時,再進行凍存。具體操作見細胞培養步驟。

細胞用途僅供科研使用。細胞培養步驟

一.培養基及培養凍存條件準備:

1準備 DM EM 培養基DM EM / F-1 2, GIBCO貨號12400024 添加NaHC0 3 2.0g/L),

85% 馬血清 10 % 牛血清 5%

2)培養條件氣相 空氣 95% 5% 溫度 37 攝氏度 培養箱度為70%-80%

3)凍存液: 90%完全培養基, 10 %DM SO, 現用現配。液氮儲存。

二.細胞處理:

1                          復蘇細胞將含有1ml   細胞懸液的凍存管在37 °C 水浴中迅速搖晃解凍, 4ml  培養基混合均勻。在1000 RPM  條件下離心4 分鐘, 棄去上清液, 補  加 1-2ml    培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養瓶中培養過夜( 或將細胞懸液加入 10cm  皿中, 加入約8ml  培養基, 培養過夜〉。天換液并檢查細胞密度。

2)   細胞傳代如果細胞密度達80%-90%, 即可進行傳代培養。對于貼壁細胞,傳代可參考以下方法:

1.    棄去培養上清, 用不含鈣、鎮離子的PBS  潤洗細胞1-2   次。

2.    2m l 液(0.25%Trypsin-0. 53m M EDTA于培養瓶中,置于 37℃培養箱中消1-2 分鐘, 然后在顯微鏡下觀察細胞消情況, 若細胞大部分變圓并脫落, 迅速拿回操作臺, 輕敲幾下培養瓶后加少培養基終止

3.    6-8m l/ 補加培養基輕輕打勻后吸出1000RPM 條件下離4 棄去上清液補加1-2ml 培養液后吹勻。

4.    將細胞懸液按1: 2 15 例分到新的含8ml 培養基的新皿中或者瓶中。

對于懸浮細胞傳代可參考以下方法:

方法收集細胞1000RPM  條件下離4 分鐘棄去上清液, 補加1-2ml 培養液后吹勻, 將細胞懸液按12 15 例分到新的含8ml 培養基的新皿中或者瓶中。

方法可選擇半數換液方式, 棄去半數培養基后, 將剩余細胞懸起, 將細胞懸液按1:   2 13 例分到新的含8ml 培養基的新皿中或者瓶中。

3細胞凍存待細胞生長狀態良好時可進行細胞凍存。貼壁細胞凍存時棄去培養基后加入少量膜酶,細胞變圓脫落后,加入約1ml    含血清的培養基后加入凍存管中再添加 10%DMSO 后進行凍存。懸浮細胞凍存時, 應將細胞收集 1000RPM   條件下離4 分鐘少量保存上清液(防止細胞吸走〉加入部分新鮮培養基, 加入到凍存管中, 在凍存管中加入10%DMSO    后進行凍存。

 

注意事項2

1.   收到細胞若發現干冰己揮發干凈、i存管瓶蓋脫落、破損及細胞有污染請立即與我聯系

2.   所有動物細胞均視為有潛在的生物危性, 必須在二級生物安全臺操作, 并請注意防護,  所有廢液及接觸過細胞的器皿需要滅菌后方能丟

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